国产AV国片精品,成人做爰黄A片免费看三区蜜臀,国偷自产视频一区二区久,国产精品久久久亚洲

答：可能的原因有：

1、膜沒有完全均勻濕透,建議 使用100% methanol浸透膜；

2、洗膜不充分，可以增加洗液體積和洗滌次數；

3、電極不平衡或者加樣位置偏斜，可以調整電極和加樣；

4、封閉物用量不足，可以提高封閉物濃度，孵育時保證封閉液完全浸沒轉印膜；

5、封閉物使用不當，比如檢測生物素標記的蛋白時不可用脫脂奶粉封閉；

6、封閉時間不夠，一般情況下室溫37度封閉1小時以上或者4度封閉過夜；

7、抗體非特異性結合，可以降低抗體濃度，減少孵育時間；

8、一抗稀釋度不適宜，可以對抗體進行滴度測試，選擇適宜的抗體稀釋度；

9、一抗孵育的溫度偏高，建議4℃結合過夜；

10、抗體濃度過高或洗滌不夠，建議降低抗體濃度，增加洗滌次數和時間；

11、化學顯色底物過多，建議按說明書加入適量的顯色底物。

答：可能的原因有：

1、膠濃度不對，不同濃度的膠跑出的蛋白條帶的位置可能有所偏差，可以調整濃度；

2、抗體孵育不充分,建議增加抗體濃度，延長孵育時間；

3、酶失活，建議直接將酶和底物進行混合，如果不顯色則說明酶失活了。選擇在有效期內、有活性的酶聯物；

4、目的蛋白存在翻譯后修飾或剪切體，建議查詢相關文獻確定；

5、標本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低，建議設置陽性對照比對結果，增加標本上樣量。

答：可能的原因有：

1、目的蛋白有多個修飾位點，本身可以呈現多條帶，建議查閱文獻或進行生物信息學分析，獲得蛋白序列的修飾位點信息，通過去修飾確定蛋白實際大小；

2、樣本處理過程中目的蛋白發生降解,建議加入蛋白酶抑制劑；樣本處理時在冰上操作；

3、雜蛋白多，建議處理目的蛋白；

4、抗體特異性不強，建議使用特異性強的抗體；

5、抗體孵育時間過久，建議減少抗體孵育時間；

6、二抗與抗原有交叉反應，建議選擇合適的封閉物；

7、二聚體或多聚體存在，建議增加蛋白質變性過程及強度；

8、底物顯色與曝光時間過長，建議縮短顯色及曝光的時間。

答：如果能夠排除下面的幾個問題，那么問題多半出現在一抗和抗原制備上。

1、二抗的HRP 活性太強，將底物消耗光；

2、ECL底物中H2O2不穩定，失活；

3、ECL底物沒覆蓋到相應位置；

4、一抗選擇不當；

5、二抗失活。